分類：動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 發(fā)布時(shí)間 閱讀： 376
一、技術(shù)簡(jiǎn)介：
抑郁癥，阿爾茲海默癥癥和帕金森被稱為三大主要精神類疾病，目前研究此類疾病模型主要方法是建立相關(guān)的動(dòng)物模型，并進(jìn)行相關(guān)行為學(xué)的實(shí)驗(yàn)分析。
本公司經(jīng)過多年摸索，成功復(fù)制動(dòng)物模型，并具備常規(guī)的行為學(xué)分析系統(tǒng)，可很好的開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
二、實(shí)驗(yàn)流程：
A.抑郁癥造模及行為學(xué)檢測(cè)
1.抑郁造模方法：
(1).糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)抑郁；
(2).慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激 (CUMS)抑郁模型；
(3).慢性束縛應(yīng)激（CRS）抑郁模型。
2.抑郁行為學(xué)檢測(cè)方法：
(1).曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)；
(2).強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)；
(3).糖水偏好實(shí)驗(yàn)；
(4).懸尾實(shí)驗(yàn) 。
B.帕金森造模及行為學(xué)檢測(cè)
造模方法：神經(jīng)毒素：6-OHDA ，MPTP
帕金森疾病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方法：帕金森動(dòng)物模型會(huì)出現(xiàn)震顫麻痹、肌肉僵直等外在行為學(xué)上的癥狀，結(jié)合腦組織病理學(xué)指標(biāo)。
a. 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：游泳試驗(yàn)，懸掛試驗(yàn)，爬桿實(shí)驗(yàn) 。
b. 病理學(xué)指標(biāo)：腦組織形態(tài)學(xué)（HE染色），紋狀體及黑質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)元數(shù)量 。
c. 生化指標(biāo)：紋狀體內(nèi)多巴胺定量檢測(cè)，抗氧化酶活力檢測(cè) 。
C. 阿爾茲海默癥造模及行為學(xué)檢測(cè)
模型簡(jiǎn)介：阿爾茲海默癥（AD）屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，除了散發(fā)型AD(sAD)外，已知APP、PSEN1和PSEN2等基因的突變會(huì)引發(fā)家族型AD(fAD)。AD的主要病理特點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)由過度磷酸化的Tau蛋白異常聚集引起的神經(jīng)原纖維纏結(jié)的形成和Aβ(白-amyloid peptides)多肽為核心的老年斑在前腦基底、大腦皮層和海馬體中的沉積。
造模方法：SD大鼠（250-300g）均采用1%戊巴比妥鈉40μg/g腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉后繼而固定于腦立體定位儀上。按照大鼠腦立體定位圖譜，以前囟為零起點(diǎn)，前囟后3.5 mm處為穿刺點(diǎn)，中線右側(cè)旁開2mm，而后牙科鉆鉆開顱骨，采用微量注射器自腦表面垂直進(jìn)針3mm，即：(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm)，雙側(cè)海馬CA1區(qū)緩慢勻速注射Aβ1-40各10 μg (1 μL)，留針5 min，退針后縫合傷口。一周后進(jìn)行水迷宮行為學(xué)檢測(cè)。
行為學(xué)檢測(cè)：所有組別，于給藥后21d，進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)，試驗(yàn)分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。
1. 定位航行實(shí)驗(yàn)：大鼠連續(xù)接受5天的訓(xùn)練，每天4次，每次時(shí)間間隔30min，記錄下大鼠從4個(gè)入水點(diǎn)和入水并找到平臺(tái)所需要的時(shí)間，即逃避潛伏期。4次潛伏期的平均成績(jī)作為當(dāng)日的最終結(jié)果進(jìn)入到最后統(tǒng)計(jì)。
2. 空間探索實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)的第6天，撤去平臺(tái)，從距離平臺(tái)的最遠(yuǎn)端入水后，將大鼠放入水中，記錄下30s內(nèi)大鼠的游泳軌跡，并觀察分析大鼠在目標(biāo)象限的停留時(shí)間，以及它的穿越平臺(tái)的次數(shù)。
檢測(cè)指標(biāo)：行為學(xué)結(jié)束后，將各組大鼠摘取全腦，冰上剝?nèi)バ∧X，將剩余部分左右對(duì)切，一半放入4%多聚甲醛中固定，用于病理學(xué)檢測(cè)。另一半取海馬用于PCR和蛋白檢測(cè)。
組織病理學(xué)：
1. 尼氏染色 海馬組織固定后石蠟切片，進(jìn)行尼氏染色，觀察海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量。光學(xué)顯微鏡下，計(jì)數(shù)視野下每組大鼠同一部位的神經(jīng)元數(shù)量，作統(tǒng)計(jì)分析。
2. 免疫熒光染色：免疫熒光染色，觀察海馬區(qū)Aβ1-40染色情況。熒光顯微鏡下，計(jì)數(shù)視野下每組大鼠同一部位的陽性斑塊數(shù)量，作統(tǒng)計(jì)分析。
3. TUNEL染色 海馬組織進(jìn)行TUNEL染色，觀察神經(jīng)元凋亡情況。熒學(xué)顯微鏡下，計(jì)數(shù)視野下每組大鼠同一部位的陽性染色數(shù)量，作統(tǒng)計(jì)分析。
標(biāo)志因子水平：
1. RT-qPCR檢測(cè)：收集海馬組織，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，PCR檢測(cè)caspase-3，Bcl-2和Bax的表達(dá)。
2. Western-blot檢測(cè)：收集海馬組織蛋白，檢測(cè)active-caspase-3，Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)。
三、結(jié)果說明：
1. 客戶提供：實(shí)驗(yàn)藥物。
2. 公司提供：動(dòng)物造模、基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果。
3. 實(shí)驗(yàn)周期：30-60個(gè)工作日。
四、聯(lián)系方式：
電話：400-681-8582
