貨號(hào)：U23-002A
檢測(cè)物種：
應(yīng)用范圍： 活死細(xì)胞染色
產(chǎn)品類型： 細(xì)胞培養(yǎng)
保存溫度： -20℃
產(chǎn)地： YOBIBIO
Calcein-AM/PI活死細(xì)胞染色試劑
本產(chǎn)品含有Calcein-AM和PI兩種組分。Calcein-AM是一種對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，其熒光呈綠色（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。由于死細(xì)胞缺乏酯酶，Calcein-AM僅用于對(duì)活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測(cè)試和短期標(biāo)記。因此，Calcein-AM常常與死細(xì)胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯(lián)合使用，同時(shí)進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的熒光雙重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，僅能穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=615 nm），因此PI僅對(duì)死細(xì)胞染色。
本產(chǎn)品中Calcein-AM濃度為：1 mM，建議工作濃度1~10 μM；PI濃度為：1 mM，建議工作濃度1~10 μM；
使用方法（僅供參考）：
1.Calcein-AM/PI工作液配制：（推薦Calcein-AM: 2 μM, PI: 4 μM） 分別取10 μl的Calcein-AM和20 μl的PI儲(chǔ)存溶液，加入至5 ml的PBS中，充分混勻，備用； 【注意】：由于Calcein-AM的穩(wěn)定性比較差，此染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，并且在當(dāng)天用完。 Calcein-AM和PI的最佳濃度是因不同的細(xì)胞種類而定，初次實(shí)驗(yàn)建議做梯度實(shí)驗(yàn)，以確定Calcein-AM和PI的最適濃度。
2.染色前先用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
3.加入適量的Calcein-AM/PI工作液（貼壁細(xì)胞覆蓋即可），在培養(yǎng)箱中孵育15-30 min；
4.用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞兩次；
5.熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞染色結(jié)果, Calcein-AM檢測(cè)波長(zhǎng)：Ex=490nm（藍(lán)光激發(fā)）, Em=515nm；PI檢測(cè)波長(zhǎng)：Ex=535 nm（綠光激發(fā)）, Em=615 nm； 儲(chǔ)存條件 -20oC保存，
一年有效；
僅供科學(xué)研究使用
注意事項(xiàng)：
1.使用前先將低溫保存的試劑在室溫條件下放置20-30 min。
2.由于Calcein-AM對(duì)濕度非常敏感，工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
3.第一次使用可對(duì)儲(chǔ)存液進(jìn)行分裝，以減少反復(fù)凍融次數(shù)。
4.血清的存在可能會(huì)干擾Calcein-AM染色，染色前請(qǐng)先用PBS洗滌細(xì)胞。
5.碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作時(shí)一定要注意防護(hù)。若接觸到皮膚，需要立即用自來水清洗。
6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
