貨號(hào)：U33-300C
檢測(cè)物種：
應(yīng)用范圍： 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
產(chǎn)品類(lèi)型：
保存溫度： 2-8℃
產(chǎn)地： YOBIBIO
UBI轉(zhuǎn)染試劑U-300 Transfection Reagent
產(chǎn)品介紹:
UBI轉(zhuǎn)染試劑U-300 （U-300 Transfection Reagent）是在前幾代轉(zhuǎn)染試劑基礎(chǔ)上，再次創(chuàng)新包含最為先進(jìn)的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)，追求更卓越的轉(zhuǎn)染性能，此試劑具有優(yōu)異的轉(zhuǎn)染效率，并可提高細(xì)胞活性，廣泛適用于難轉(zhuǎn)染的及常見(jiàn)的細(xì)胞種類(lèi)（例如HEK 293和Hela細(xì)胞）。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
提供卓越的性能，以針對(duì)難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系實(shí)現(xiàn)了較高轉(zhuǎn)染效率的試劑
轉(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞作用溫和，毒性很低
相比其他轉(zhuǎn)染試劑具有更高的轉(zhuǎn)染效率和更低的用量
適用細(xì)胞更加廣泛，有效轉(zhuǎn)染難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系
能有效轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型包括：
肺癌細(xì)胞（A549、NCI-H460）骨肉瘤細(xì)胞（U-2 OS、Saos-2）
結(jié)腸癌細(xì)胞（Caco2、SW480）胰腺癌細(xì)胞（PANC-1）
皮膚黑色素瘤細(xì)胞（SK-MEL-28）成纖維細(xì)胞（3T3、COS-7）
肝細(xì)胞（HepG2、HuH7）紅白血病細(xì)胞（K562）
乳腺癌（MCF7、Hs578T）前列腺癌（LNCap）
成肌細(xì)胞（C2C12、L6 CRL-1458）
儲(chǔ)存事項(xiàng):
冰袋或者濕冰運(yùn)輸，短時(shí)間內(nèi)可室溫運(yùn)輸，但需避免光源熱源。
長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存于 4℃，切勿凍存，有效期24個(gè)月。
產(chǎn)品用于：僅供研究使用，不適用于人或動(dòng)物的體外診斷與治療。
由于實(shí)驗(yàn)受多種因素影響具有不確定性，本說(shuō)明書(shū)操作說(shuō)明僅供參考，最終解釋權(quán)歸本公司所有。
警告！產(chǎn)品對(duì)人體危害性未知，請(qǐng)遵循操作說(shuō)明。穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)眼鏡、衣服和手套！如果不小心接觸，應(yīng)立即用大量的水沖洗，如引起身體不適應(yīng)前往醫(yī)院治療。
注意事項(xiàng):
轉(zhuǎn)染siRNA至細(xì)胞時(shí)，遵循如上所述的DNA實(shí)驗(yàn)方案，但在稀釋siRNA 時(shí)不要加入
B-300試劑。在無(wú)血清培養(yǎng)基中制備 DNA-U33-300復(fù)合物，直接將其加入含細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞中。(有無(wú)血清或抗生素均可 ）
轉(zhuǎn)染后無(wú)需去除轉(zhuǎn)染復(fù)合物或者更換/添加培養(yǎng)。
整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程避免細(xì)胞污染，由于不同細(xì)胞耐受性不同，我們建議您在做批量實(shí)驗(yàn)前，可根據(jù)實(shí)際質(zhì)粒和細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，分不同梯度量先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索最佳DNA和U33-300 Transfection Reagent的混合比例。步驟里面測(cè)試推薦的兩種濃度的并非固定濃度，優(yōu)化后可根據(jù)自身細(xì)胞情況調(diào)整用量。
操作步驟
（以六孔板的貼壁細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染為例)
細(xì)胞準(zhǔn)備。轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞接種至六孔板內(nèi)，細(xì)胞接種數(shù)量視其生長(zhǎng)速度和細(xì)
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胞系類(lèi)型而定，一般為0.5-1×10 個(gè)細(xì)胞。轉(zhuǎn)染時(shí)要求細(xì)胞生長(zhǎng)的匯合度為70~90%，轉(zhuǎn)染前兩小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。(細(xì)胞狀態(tài)與轉(zhuǎn)染效果影響很大，選擇最佳的細(xì)胞狀態(tài)更有利于轉(zhuǎn)染效率提高和轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)的恢復(fù)）
將3.75 μl和7.5 μl 的U33-300分別加至另外125 μl無(wú)血清的OPTI-MEM培
養(yǎng)基中，輕輕混勻，室溫靜置2-3分鐘。
將5 ug 質(zhì)粒DNA (0.5-5μg/μL) 加入到250μl無(wú)血清OPTI-MEM培養(yǎng)基稀釋?zhuān)?
DNA 預(yù)混液勻，然后添加10 ul B300 試劑并充分混勻。
4.在每管已稀釋的U-300試劑中加入等體積稀釋的 DNA孵育10-15分鐘。
5.將DNA和U33-300混合液滴加至六孔板的孔內(nèi)，前后左右晃動(dòng)孔板混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6.轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)后，倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達(dá)，或加入抗性培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系單克隆。
用量參照表：
