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實驗服務(wù)
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新聞資訊
產(chǎn)品介紹：
YobibioTrans R-100 RNA Transfection Reagent是一種獨有的RNAi特異性陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，本品推薦用于將siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor 等小片斷RNA 轉(zhuǎn)染入動物細(xì)胞（包括各種細(xì)胞系、原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等）。本品可以常溫運輸，本品在多種細(xì)胞系的驗證中均表現(xiàn)了很好的RNA 轉(zhuǎn)染效率，并有很低的細(xì)胞毒性。
特點：
規(guī)格包裝: （備注：以下為常用規(guī)格，更多規(guī)格可根據(jù)客戶需求定制）
儲存事項：冰袋或者濕冰運輸，短時間內(nèi)可室溫運輸，但需避免光源熱源，長時間儲存于 4℃，切勿凍存，有效期 24 個月。
重要提示：
產(chǎn)品用于：僅供研究使用，不適用于人或動物的體外診斷與治療。
由于實驗受多種因素影響具有不確定性，本說明書操作說明僅供參考，最終解釋權(quán)歸本公司所有。
警告！產(chǎn)品對人體危害性未知，請遵循操作說明。穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o眼鏡、衣服和手套！如果不小心接觸，應(yīng)立即用大量的水沖洗，如引起身體不適應(yīng)前往醫(yī)院治療。
注意事項
•整個實驗過程避免細(xì)胞污染由于不同細(xì)胞耐受性不同，由于不同細(xì)胞耐受性不同，我們建議您在做批量實驗前，可根據(jù)實際質(zhì)粒和細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，分不同梯度量先做預(yù)實驗，摸索最佳 siRNA 和 YosiTrans R-100 的混合比例。優(yōu)化后可根據(jù)自身細(xì)胞情況具體用量。
•采用本品進行轉(zhuǎn)染，RNA 用質(zhì)量(ug)進行計量，對21nt 雙鏈的siRNA 來說，1OD=3.0nmol=40ug。
•siRNA 等較短RNA 請參照表1 中siRNA 用量，mRNA、shRNA 等較長RNA請參照表1 中mRNA 用量。
•如轉(zhuǎn)染后需要用Trizol 提取RNA，建議轉(zhuǎn)染后6 小時換液。
操作步驟 (不同的細(xì)胞已及轉(zhuǎn)不同面積的孔板操作起來略有不同，以 24 孔板 siRNA 轉(zhuǎn)染為例)
1.提前一天細(xì)胞種植 貼壁細(xì)胞：提前一天將細(xì)胞種植在24 孔板中，以轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度在30％左右為宜，轉(zhuǎn)染前全培養(yǎng)基總量為0.45ml。
懸浮細(xì)胞：采用對數(shù)生長期的細(xì)胞，數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)的1/3 進行轉(zhuǎn)染實驗。
2.轉(zhuǎn)染過程
⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入無血清稀釋液，充分混勻，制成RNA稀釋液，終體積為25μl。
注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM 或1640。
⑵取1ul 的R100，然后加入24ul 無血清稀釋液體，充分混勻，制成R100 稀釋液，終體積為25μl。室溫靜置5 分鐘。
⑶將R100 稀釋液和RNA 稀釋液充分混合（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10 次以上）混合，室溫靜置15 分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。
⑷將50μl 轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到有0.45ml 全培養(yǎng)基（可含10%血清和抗生素）的細(xì)胞上，混合均勻。
⑸轉(zhuǎn)染后6 小時觀察細(xì)胞狀態(tài)，如狀態(tài)良好可不必更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時得到結(jié)果。
注意：
1.siRNA 轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)24-72 小時在mRNA 水平得到結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)24-96 小時在蛋白水平得到結(jié)果。mRNA 轉(zhuǎn)染后，根據(jù)需要在24 小時后得到結(jié)果。
2.由于血清和培養(yǎng)條件等差異，轉(zhuǎn)染后鏡下培養(yǎng)基中可能出現(xiàn)少量黑點狀沉淀，為轉(zhuǎn)染試劑和血清中蛋白結(jié)合產(chǎn)物，不影響轉(zhuǎn)染結(jié)果和細(xì)胞狀態(tài)，可通過換液除去。
根據(jù)優(yōu)化實驗結(jié)果，固定RNA(μg):轉(zhuǎn)染試劑量(μl)的比值，按培養(yǎng)器皿表面積比例應(yīng)用到其他培養(yǎng)容器。
本公司所有產(chǎn)品僅供科研使用