貨號(hào)：U22-003A
檢測物種：
應(yīng)用范圍： 細(xì)胞培養(yǎng)
產(chǎn)品類型： 細(xì)胞轉(zhuǎn)染/增殖試劑
保存溫度： 2-8℃
產(chǎn)地： YOBIBIO
CCK-8細(xì)胞增殖檢測試劑說明書
概述： CCK-8（Cell Count Kit-8）是一種利用WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）快速檢測細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)的方法。WST-8是一種類似MTT的四唑鹽，在電子載體的存在下，被活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原生成水溶性的橙黃色Formazan（甲臜），通過比色法檢測甲臜生成量可以反映試驗(yàn)中活細(xì)胞的數(shù)量。
操作方法：
細(xì)胞毒性檢測
1. 接種細(xì)胞：接種對數(shù)期的細(xì)胞至96孔板，接種數(shù)量1~5×103個(gè)/孔，每孔100 μl，每組設(shè)置3~5個(gè)復(fù)孔，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱；
2. 樣品處理：待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的樣品處理細(xì)胞，然后置于培養(yǎng)箱中孵育一定的時(shí)間（如：24 h、48 h、72 h）；
3. CCK-8孵育：每孔加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，并將培養(yǎng)板置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育1~4 h；（可進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定孵育時(shí)間）；
4. 上機(jī)檢測：將孵育后的細(xì)胞培養(yǎng)板置于酶標(biāo)儀上，在450 nm處檢測其吸光值；
儲(chǔ)存條件: 4℃保存，半年有效；-20℃保存，兩年有效
2. 以Hela細(xì)胞為例，細(xì)胞按1.25×103 ~ 20×103個(gè)/孔的密度梯度接種至96孔板中，培養(yǎng)4 h后，待細(xì)胞完全貼壁，每孔加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，置于培養(yǎng)箱中孵育1 h后，在450 nm處檢測其吸光值，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng)：
1. 使用前先將低溫保存的試劑在室溫條件下放置20-30 min。
2. 接種對數(shù)期生長的細(xì)胞，注意使細(xì)胞分散均勻，確保每個(gè)復(fù)孔中的細(xì)胞數(shù)量一致，減少誤差。
3. 為了達(dá)到最佳的實(shí)驗(yàn)效果，建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定最佳的細(xì)胞接種密度及CCK-8試劑孵育時(shí)間；以貼壁細(xì)胞為例，接種密度約1~5×103個(gè)/孔；孵育時(shí)間為1~4 h，多數(shù)細(xì)胞孵育約30 min即可觀察到明顯的顏色變化。
4. 設(shè)置空白對照，在無細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8檢測，去除本底對吸光值的干擾。
5. 如果OD值太高，建議降低細(xì)胞接種密度或減少CCK-8試劑孵育時(shí)間。
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