YOBIBIO TRezol Reagent總RNA提取試劑
產(chǎn)品介紹: Trezol是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍廣 泛，可以從動(dòng)物組織、 植物材料、 各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。 該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107 )均有較好的分離效果。樣品在TRezol中被充分裂解的同時(shí)能夠最大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會(huì)分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA 分布在上清層中。收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、體外翻譯等。
TRezol 試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如， 從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色， 可見許多介于7kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)， 兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5 kb(28S)和~2 kb(18S)， 低分子量=RNA介于0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。(注意如果是瓊脂糖凝膠電泳，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置，不同濃度的凝膠位置變化較大。)
產(chǎn)品特點(diǎn)： 一份樣品同時(shí)提取RNA、DNA和蛋白質(zhì)，具有出色的裂解能力
適用于組織、細(xì)胞、血清、病毒和細(xì)菌等多種樣品類型適用于小量樣品（50-100mg組織、5×107細(xì)胞），
適用于大量樣品（≥1g組織或≥1×107細(xì)胞）。
維持RNA的完整性 從多種樣本體積和來源獲得可靠的純化RNA 穩(wěn)定性高，易保存，有效期長(zhǎng) 高效性操作簡(jiǎn)單快捷 適用于多個(gè)分子靶點(diǎn)的提取
注意事項(xiàng)：
1.樣品用TRezol勻漿后，如果不即刻加入氯仿之前，置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成cDNA，Northern Blot等。
2.若下游實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA非常敏感，建議用 RNase free DNase I對(duì)RNA進(jìn)行處理。
3.自備試劑：氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專用）、75%乙醇(用DEPC處理過的水配制)、RNase free water或者DEPC處理過的水。
操作步驟：
提示：用TRezol抽提RNA時(shí)要戴手套和防護(hù)罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學(xué)通風(fēng)櫥完成操作。避免呼吸道吸 入。如無特殊說明，所有的操作應(yīng)該在在15~30°C的室溫條件下。
勻漿 植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在TRezol中迅速研 磨，每50-100mg組織加入1ml TRezol，混勻。注意：樣品體積一般不要超過TRezol體積的10%。
動(dòng)物組織：取新鮮或-70℃凍存動(dòng)物組織盡量剪碎，每30-100mg組織加入1ml TRezol，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理�；蛟谝旱醒心ズ蠹尤隩Rezol 1ml混勻。注意：樣品體積一般不要超過TRezol體積的10%。
單層培養(yǎng)細(xì)胞：盡量去除干凈殘留培養(yǎng)液后直接往直徑3.5 cm的培養(yǎng)板中加入1ml 的TRezol覆蓋并反復(fù)吹打裂解細(xì)胞。依據(jù)培養(yǎng)板的面積而不是依據(jù)細(xì)胞的數(shù)量來決定所需的TRezol 量（每10cm2加1ml）。當(dāng)TRezol 量不足時(shí)可導(dǎo)致抽提的RNA中污染有DNA。
注意：貼壁培養(yǎng)細(xì)胞往往不能完全從培養(yǎng)瓶（皿）脫落，這并不意味著裂解不完全，此時(shí)細(xì)胞膜實(shí)際已經(jīng)完全破裂開，并已釋放出全部RNA，繼續(xù)做即可。 細(xì)胞懸液： 離心收集細(xì)胞。 在TRezol 試劑中用移液管反復(fù)吹打來裂解細(xì)胞。每5~10×106的動(dòng)物細(xì)胞，植物或酵母菌細(xì)胞或每1×107細(xì)菌加1ml的TRezol。在加入TRezol 前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞， 因?yàn)槟菢訒?huì)增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細(xì)菌可能需要使用勻漿器。 血液：推薦使用本公司的TRezol Reagent LS(貨號(hào)：B102) ，這是全血或者液體樣品專用的TRezol Reagent，LS就是Liquid Sample 液體樣品的首字母簡(jiǎn)寫。 將勻漿樣品劇烈震蕩后在室溫條件下放置5分鐘以使核蛋白體完全解離。
可選步驟： 在4°C的條件下以12,000 rpm的離心力離心10分鐘，取上清。 如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或肌肉，植物的塊莖結(jié)節(jié)等可離心去除。離心后的沉淀中包含有細(xì)胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織的樣品時(shí)，上層是大量油脂 應(yīng)除去。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步。
每1ml TRezol加0.2ml氯仿。蓋緊管蓋，劇烈震蕩15秒并將其在室溫下放置2~3分鐘。 在4°C 12,000 rpm的離心力高速冷凍離心10-15分鐘。離心后混合物分成三層：下層紅色有機(jī)苯酚氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為所 加TRezol 容量的50-60%。 （有機(jī)層和中間層是蛋白和DNA，如果需要提取，請(qǐng)聯(lián)系我們索取提取方法）。 將水樣層轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入等體積異丙醇。 顛倒混勻后室溫放置10分鐘。RNA沉淀在離心前通常不可見，離心后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀。
在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心10分鐘，棄上清。 加入75%乙醇洗滌沉淀。每使用1ml TRezol用1ml 75%乙醇對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌。 在室溫或者4°C 12,000 rpm離心3分鐘，棄上清，注意不要丟失RNA沉淀。
注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-100μl RNase free wate，充分溶解RNA，得到的RNA保存在 -70℃，防止降解。注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。
