分類：技術(shù)支持 發(fā)布時間 2023/5/18 閱讀： 859
方案A：組織培養(yǎng)細(xì)胞的制備。
方案B：淋巴組織細(xì)胞制備。
方案C：非淋巴組織細(xì)胞制備。
方案D：全血PBMC的分離。
小貼士
1、流式細(xì)胞儀檢測需要將細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液。
2、避免細(xì)胞成團(tuán)，以免堵塞流式細(xì)胞儀。
3、實體組織制備單細(xì)胞懸液需要物理方法分離或酶消化法進(jìn)行，具體組織的方法，依照經(jīng)驗來進(jìn)行。
方案A: 組織培養(yǎng)細(xì)胞的制備
實驗材料：
Accutase™ 酶細(xì)胞分離培養(yǎng)基 (eBioscience Cat. No. 00-4555)
eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的離心管。
實驗流程：
1、如果是懸浮細(xì)胞，則小心將細(xì)胞移入離心管中，進(jìn)行計數(shù)和活力分析。進(jìn)行步驟3.
2、如果是貼壁細(xì)胞，建議使用Accutase™ 酶細(xì)胞分離培養(yǎng)基 (eBioscience Cat. No. 00-4555)是細(xì)胞團(tuán)塊分離，制備成單細(xì)胞懸液后置于離心管中計數(shù)和活力分析。（注意:accutase 可能會改變某些細(xì)胞表位，應(yīng)該預(yù)實驗觀察避免其干擾檢測）
3、300g 離心5min。棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。
方案B：淋巴組織細(xì)胞制備。
實驗材料：
60×15mm 的組織培養(yǎng)皿
5ml 注射器
細(xì)胞過濾器（尼龍網(wǎng)過濾）
eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的離心管。
實驗方案：
1、獲取組織（脾臟，淋巴結(jié)或胸腺）加入5~10ml eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)，使用5ml注射器注射心研磨組織（或采用兩片載玻片研磨亦可）。
2、收集磨碎的細(xì)胞懸液，過濾至離心管中計數(shù)和活力分析。
3、300g 離心5min。棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。
方案C：非淋巴組織細(xì)胞制備。
剪刀和手術(shù)刀片
PBS
60×15mm 的組織培養(yǎng)皿
5ml 注射器
細(xì)胞過濾器（尼龍網(wǎng)過濾）
eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的離心管。
實驗流程:
1、獲取組織剪碎或切碎組織為2~4mm碎塊，用PBS稀釋適量的酶進(jìn)行消化（溫度，方法依照酶的說明書）。
2、小心分離細(xì)胞團(tuán)塊，過濾除去死細(xì)胞和碎片。
3、300g 離心5min，棄去上清。加PBS 5ml 300g 離心5min，棄去上清，重復(fù)一次。計數(shù)和活力分析。
4、300g 離心5min，棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。
方案D：全血PBMC的分離。
實驗材料：
PBS
Ficoll® 淋巴細(xì)胞分離液
eBioscience® 流式染色緩沖液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的離心管。
實驗流程：
1、以PBS 1:1稀釋血樣。將血樣輕輕加到2ml Ficoll® 淋巴細(xì)胞分離液或其他品牌亦可。
2、1000g離心20min,小心吸取分離液和PBS之間的霧狀細(xì)胞，即為PBMC。至新的離心管中。
3、4度，300g 離心5min,棄上清。應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，計數(shù)和細(xì)胞活力，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。
