一、技術(shù)簡介：
成球能力是腫瘤干細(xì)胞體外鑒定的一個(gè)重要方法。其判斷的是單個(gè)細(xì)胞在合適的條件培養(yǎng)基中自我更新的能力，一般用細(xì)胞球形成效率（Sphere Formation Efficiency, SFE）表示。對于某些腫瘤如膠質(zhì)瘤和乳腺癌，它們的腫瘤干細(xì)胞在體外條件培養(yǎng)時(shí)相對較容易形成細(xì)胞球，而另一些上皮腫瘤如肝癌、結(jié)腸癌等則成球相對困難。
二、實(shí)驗(yàn)流程：
為了促進(jìn)細(xì)胞的成球生長，需使用低粘附的培養(yǎng)板防止細(xì)胞貼壁，結(jié)合使用無血清培養(yǎng)基（加入B27和合適濃度的生長因子等添加劑，各種腫瘤報(bào)道的不盡相同，需要參考相關(guān)文獻(xiàn)），以及使用1%濃度的甲基纖維素（methyl cellulose）抑制細(xì)胞聚集以確保一個(gè)細(xì)胞球來源于單個(gè)細(xì)胞等，建立了一套新的方法，獲得了不錯(cuò)的效果。目前該方法已經(jīng)在多種腫瘤干細(xì)胞的研究中得到應(yīng)用。
SFE的計(jì)算方法：
使用上述方法培養(yǎng)10-14天以后，即可計(jì)算直徑大于75um的細(xì)胞球的個(gè)數(shù)。
SFE=每孔中直徑大于75um的細(xì)胞球的個(gè)數(shù) / 每孔中原始接種細(xì)胞的總數(shù)。
細(xì)胞球的傳代：
通常情況下，我還需要檢測細(xì)胞連續(xù)傳代后的自我更新能力，此時(shí)就需要進(jìn)行細(xì)胞球的傳代。方法是，過70μm的細(xì)胞篩收集培養(yǎng)10-14天后的細(xì)胞球，使用胰酶消化成單細(xì)胞，將合適數(shù)量的細(xì)胞鋪入96孔板繼續(xù)進(jìn)一步培養(yǎng)10-14天，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞球的個(gè)數(shù)，計(jì)算SFE。
三、聯(lián)系方式：
電話：400-681-8582
