10x Genomics 單細(xì)胞免疫譜測(cè)序
可同時(shí)檢測(cè)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組及B細(xì)胞、T細(xì)胞的多樣性
通過Feature Barcoding技術(shù)，還可檢測(cè)細(xì)胞表面蛋白和抗原特異性
加速對(duì)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的研究和理解
10x Genomics 利用5'端接頭的通用引物和免疫分子恒定區(qū)的巢式引物進(jìn)行T細(xì)胞和B細(xì)胞的V(D)J富集，從而實(shí)現(xiàn)高通量的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和成對(duì)的重鏈和輕鏈（B細(xì)胞）或α和β鏈（T細(xì)胞）的全長測(cè)序。為免疫組庫全面、系統(tǒng)的研究提供了高效的技術(shù)平臺(tái)，對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制研究有重要的意義。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)：
（1）可實(shí)現(xiàn)成對(duì)的重鏈和輕鏈（B細(xì)胞）或α和β鏈（T細(xì)胞）的全長測(cè)序；
（2）精細(xì)到單細(xì)胞水平，能獲得大量單細(xì)胞的免疫組庫數(shù)據(jù)；
（3）同批樣本可同時(shí)獲得mRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)和免疫組庫數(shù)據(jù)；
（4）靈活的獲取量，可在7分鐘內(nèi)封裝100-80000個(gè)單細(xì)胞，進(jìn)而建庫測(cè)序。
應(yīng)用領(lǐng)域：
（1）抗體的鑒定和新抗體的發(fā)現(xiàn)；
（2）揭示Ig 庫的發(fā)展，繪制全局Ig 庫；
（3）研究傳染性疾病，如感染發(fā)展中的抗體進(jìn)化譜系等；
（4）研究免疫失調(diào)疾病的V(D)J 重組傾向性，尋找免疫失調(diào)疾病的標(biāo)記物；
（5）癌癥早期檢測(cè)、癌癥進(jìn)程和復(fù)發(fā)診斷的標(biāo)記物以及腫瘤免疫機(jī)制的研究。
樣本準(zhǔn)備：
（1）細(xì)胞類型：T細(xì)胞、PBMC、 B細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞；
（2）細(xì)胞來源：血液提取、磁珠富集、流式分選、組織解離、體外擴(kuò)增、冷凍保存；
（3）細(xì)胞大�。褐睆�<40 μm；
（4）細(xì)胞濃度：5×105~1.2×106/ml；
（5）細(xì)胞活性：>90%；
（6）細(xì)胞數(shù)目：≥ 1×105 cells/sample。
（7）保存運(yùn)輸：為了減少運(yùn)輸過程及反復(fù)凍融對(duì)細(xì)胞造成的損傷，攸碧艾提供上門服務(wù)！
應(yīng)用案例：
Single-Cell Map of Diverse Immune Phenotypes in the Breast Tumor Microenvironment, Cell, 2018.
本文研究人員從8名乳腺癌患者的腫瘤樣本及配對(duì)的正常乳腺組織、血液和淋巴結(jié)樣本中獲得45,000個(gè)免疫細(xì)胞，開展單細(xì)胞RNA測(cè)序?qū)嶒?yàn)。利用SEQC流程、Biscuit算法等，對(duì)這些免疫細(xì)胞進(jìn)行聚類和鑒定。
后期，研究人員又通過10x Genomics Chromium平臺(tái)，對(duì)來自3個(gè)額外乳腺癌組織的27,000多個(gè)T細(xì)胞，進(jìn)行配對(duì)的單細(xì)胞RNA測(cè)序和TCR測(cè)序。
最終，該研究獲得了一份乳腺癌微環(huán)境中多種免疫表型的單細(xì)胞圖譜，這份圖譜反映了適應(yīng)性和先天免疫系統(tǒng)在免疫細(xì)胞上的多樣性，以及與周圍組織相關(guān)的巨大變化。
