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實(shí)驗(yàn)服務(wù)

EXPERIMENTAL SERVICE

Real-Time PCR

分類:分子實(shí)驗(yàn)   發(fā)布時(shí)間    閱讀: 417
一、服務(wù)簡(jiǎn)介:
Real-Time PCR 技術(shù),又稱實(shí)時(shí)定量熒光PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行總量分析或通過(guò)Ct值對(duì)模板進(jìn)行相對(duì)定量。
二、服務(wù)內(nèi)容:
1.相對(duì)定量PCR。
2.絕對(duì)定量PCR。

送樣運(yùn)輸要求:
1. 樣品處理 a) 動(dòng)物組織:常規(guī)組織100mg,脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加。將組織剪切成合適大小后(建議組織塊長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm),然后迅速完全浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolidTM試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolidTM試劑進(jìn)行RNA保護(hù)。)
 b) 植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大。ńㄗh長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速完全浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,對(duì)于此類組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)
c) 細(xì)胞等樣本:收集不小于10^6個(gè)細(xì)胞的沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后迅速加入5~10倍體積的RNAsolidTM試劑。
 d) 酵母、細(xì)菌等樣本:離心棄上清,收集小米粒大小的單菌體沉淀,然后迅速加入適量的RNAsolidTM試劑完全浸沒(méi)菌體沉淀。
 e)全血:最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,-20度運(yùn)輸。
f)血清:最少1 mL,干冰運(yùn)輸。
g) RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運(yùn)輸。 h)cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運(yùn)輸。
2. 樣品保存及運(yùn)輸 加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會(huì)開(kāi)始降解。室溫(25℃)穩(wěn)定保存1周,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中,4℃條件下可穩(wěn)定保存1個(gè)月,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。長(zhǎng)期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過(guò)夜,然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長(zhǎng)期穩(wěn)定保存3~5年。
三、聯(lián)系方式: 
電話:400-681-8582